eGFP mRNA可以表达增强绿色荧光蛋白,开放阅读框序列源于水母(Aequorea Victoria),激发与发射波长 (Ex/Em) 分别为488nm和507nm。常用于mRNA疗法中实验体系或递送体系的优化与验证。
凯发一触即发现货mRNA具备Cap1结构,提升mRNA翻译效率和表达量,添加100 poly A尾模拟成熟mRNA,更稳定。可针对全序列进行m1Ψ或5-MOU修饰,有效降低免疫原性和细胞毒性。
细胞表达验证结果
实验1:eGFP mRNA (m1Ψ)
实验方法:96孔板中,每孔加入0.2 μg mRNA + 0.5 μL lipofectamine2000等转染A549细胞(4 x 104 个细胞 / 孔),孵育16-24小时,用酶标仪、流式细胞仪、荧光显微镜或共聚焦显微镜检测eGFP表达,激发波长485nm,发射波长535nm。
实验结果:A. 共聚焦显微镜,eGFP mRNA (m1Ψ)转染组可见明显的eGFP蛋白的绿色荧光,蓝色荧光为Dapi细胞核核料。B. LC-MS检测eGFP mRNA加帽效率高达99.5%。
实验2:eGFP mRNA (5-MOU)
实验方法:96孔板中,每孔加入0.2 μg mRNA + 0.5 μL lipofectamine2000等转染A549细胞(4 x 104 个细胞 / 孔),孵育16-24小时,用酶标仪、流式细胞仪、荧光显微镜或共聚焦显微镜检测eGFP表达,激发波长485nm,发射波长535nm。
实验结果:24h后,酶标仪检测,eGFP mRNA转染组中eGFP具有较高的表达量。