GenScript预制胶选择指南

凯发一触即发蛋白预制胶推荐使用GenBox电泳槽，独特挡板使PAGE胶受力均匀，电泳条带更加平直。

凯发一触即发蛋白预制胶可兼容国内外常见mini凝胶电泳槽，部分电泳槽名称如下：

Bio-Rad Mini-PROTEAN^® II&3电泳槽*

六一、天能

GradiGel Mini 4-Cell

IBI Universal Protein System

EC 4-Cell

Hoefer Mighty Small™（SE250/SE260）

Daiichi Mini 2-Gel&6-Gel

Invitrogen Novex XCell & Surelock^®（搭配凯发一触即发特供挡板一起使用）

*使用前请将电泳槽内芯绿色胶条反转，详情见说明书

凯发一触即发蛋白预制胶可兼容MOPS或MES电泳缓冲液，能实现更宽范围分子量蛋白的分离，搭配MOPS使用更好的分离大分子蛋白（>30kDa)，搭配MES使用能更好的分离小分子蛋白（<30kDa) 。

预制胶类型	孔数	最大上样量/well	推荐蛋白量/well
SurePAGE™蛋白预制胶	10	80 µl	60 µg
	12	60 µl	60 µg
	15	40 µl	60 µg

凯发一触即发提供两种上样缓冲液：5X Sample Buffer（Cat. No. MB01015）含变性剂SDS和10%还原剂β-巯基乙醇；4X LDS Sample Buffer（Cat. No. M00676）含变性剂LDS，不含还原剂。

下图显示，与SDS样品缓冲液相比，LDS样品缓冲液可以更好地分离蛋白质样品。

产品详情

• 应用数据

  超强均一性

  

  凝胶：SurePAGE，4-12%，12 wells（Genscript，M00653）
  染色：eStain蛋白染色仪（Genscript，L00657C），9min 30s
  Lane1，3，5，7，9，11：4μl Color Prestained Protein Standard，Broad Range (11-245kDa) (P7712S)；
  Lane2，4，6，8，10，12：6μl E.coli cell lysate。

  凯发一触即发独特的凝胶制造工艺保证批次间优秀的稳定性和可靠的条带分布一致性。

  优越的分辨率

  

  从图中可以看出，SurePAGE蛋白预制胶的分辨率优于Express Plus和Competitor A和B，尤其在30KDa以下的小片段的分辨率上更高，条带更加锐利和清晰。

  凝胶：SurePAGE，4-12%，12 wells（Genscript，M00653）
  样品：Top 10 cell
    染色：eStain蛋白染色仪（Genscript，L00657C），9min 30s

  超高的灵敏度

  

  从下图中可以看出从下图中可以看出SurePAGE™预制胶能够检测含量低至12.5ng的蛋白样品，比其他产品具有更高的检测灵敏度。

  凝胶：SurePAGE™，4-12%，12 wells（Genscript，M00653）
  样品：
  Lane 1：Protein Standard（MM1397-500），5μl；
  Lane 2-8：溶菌酶含量分别为800ng，400ng，200ng，100ng，50ng，25ng，12.5ng；
  Lane 9-10：Protein Standard（MM1397-500），5 ul
  染色：eStain蛋白染色仪（Genscript，L00657C），9min 30s
  

  Western blot转印分析

  

  SurePAGE蛋白预制胶的灵敏度和分辨率很优越，能够确保低含量的蛋白条带也能够清晰锐利，在Western blot转印之后含量低的小条带能够顺利地被检测到，有了SurePAGE™预制胶这个助手，您的Western blot实验会更加轻松！

  凝胶：SurePAGE™ Gel，4-20%，10 wells（GenScript，M00655）
  转膜：eBlot™ L1快速湿转仪（L00686），10min，NC膜
  上样：WB-MASTER Protein Standard（GenScript，M00521），其中80KDa条带的蛋白含量
  从左到右依次为：10ng，5ng，2.5ng，1.25ng，0.625ng，0.3125ng。

• 产品参数

  凝胶厚度	1.0 mm
  凝胶体系	Bis-Tris
  凝胶大小	Mini Gels (10 x 8 cm)
  保质期	2-8℃储存18个月，常温25℃左右可保存6个月
  电泳缓冲液	Tris-MOPS-SDS Running Buffer Powder (Cat. No. M00138) 或MES SDS Running Buffer Powder (Cat. No. M00677)

产品列表

• SurePAGE™蛋白预制胶

  产品编号	名称	数量	价格	操作
  M00652	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 4-12%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00653	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 4-12%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00654	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 4-12%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00655	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 4-20%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00656	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 4-20%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00657	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 4-20%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00658	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 8-16%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00659	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 8-16%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00660	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 8-16%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00661	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 8%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00662	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 8%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00663	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 8%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00664	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 10%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00665	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 10%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00666	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 10%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00667	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 12%, 10 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00668	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 12%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00669	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 12%, 15 wells		￥350.00 10 PK/BOX
  M00719	SurePAGE™, Bis-Tris, 10x8, 15%, 12 wells		￥350.00 10 PK/BOX

• 蛋白预制胶电泳相关试剂列表

  产品编号	名称	数量	价格	操作
  M00138	Tris-MOPS-SDS Running Buffer Powder		￥150.00 1 Box (5/PK)
  M00139	Transfer Buffer Powder		￥248.00 1 Box (10/PK)
  M00676	4X LDS Sample Buffer		￥100.00 10 ml 250 ml
  M00677	MES SDS Running Buffer Powder		￥150.00 1 box(5pcs)
  MB01015	5X Sample Buffer		￥150.00 5 ml

Western Blot流程

蛋白纯化、分析相关产品

资源

常见问题解答

• 1. 凯发一触即发蛋白预制胶在使用前，有哪些注意事项？

  凯发一触即发蛋白预制胶打开包装即可用于蛋白电泳实验，但请一定撕掉胶板底部蓝色封口胶带、不能使用Tri-Gly电泳缓冲液、并请检查电泳槽密封条是否需要翻转，以保证内槽密封。

• 2. 使用凯发一触即发蛋白预制胶，应该使用什么电泳缓冲液？

  GenScript蛋白预制胶可兼容MOPS或MES电泳缓冲液，能实现更宽范围分子量蛋白的分离，搭配MOPS使用更好的分离大分子蛋白（>30kD)，搭配MES使用能更好的分离小分子蛋白（<30kD) 。不适配Tris-Gly电泳缓冲液，表现为电泳到凝胶一半位置无法继续迁移，且marker分不开。

• 3. 1 Х MOPS电泳缓冲液配制后是否需要调节pH值？

  凯发一触即发Tris-MOPS-SDS Running Buffer Powder（Cat.No：M00138）在产品设计时已经考虑了成品缓冲液pH值。配制成溶液后即可用于蛋白电泳实验，pH≈7.6。

• 4. 5X Sample Buffer（Cat. No. MB01015）和4X LDS Sample Buffer（Cat. No. M00676）的区别是什么，是否含还原剂？

  凯发一触即发提供5X Sample Buffer含变性剂SDS和10%还原剂β-巯基乙醇；4X LDS Sample Buffer含变性剂LDS，不含还原剂，如需要可以按照说明书中比例额外添加。

• 5. 一块胶完成电泳需要多长时间？

  电泳时间取决于选取的电泳缓冲液、凝胶浓度以及兴趣蛋白的分子量大小。在MOPS电泳缓冲液，200V恒压条件下，电泳时间通常是30+分钟，一片凝胶电泳时，初始电流大约在95-120mA。高电压会引起电泳实验体系温度上升，导致电泳过程出现不可预料的情况，适当降低电泳仪输出电压设定，可以帮助改善电泳情况。

• 6. ExpressPlus™预制胶和SurePAGE™预制胶可以用于哪些电泳槽？

  兼容以下电泳槽：

  • 六一、天能
  • GradiGel Mini 4-Cell
  • IBI Universal Protein System
  • EC 4-Cell
  • Hoefer Mighty Small（SE 260/SE 250）
  • Daiichi Mini 2-Gel&6-Gel
  • Bio-Rad Mini-PROTEANII&3
  • Invitrogen Novex XCell I，II，&Surelock（须与凯发一触即发提供的挡板一起使用）
• 7. GenScript蛋白预制胶后续做WB实验推荐蛋白上样量是多少？

  因为每个样品中目的蛋白含量以及抗体和蛋白结合的效果都不一样，建议通过预实验摸索最佳上样量或参考文献；第一次做可以从10ug开始梯度上样，再通过实验结果调整。 

• 8. 蛋白预制胶的pH值为多少？

  凯发一触即发Bis-Tris蛋白预制胶pH6.4。

• 9. 凯发一触即发蛋白预制胶能否用于非变性电泳？

  预制胶不含SDS，可以用于酸性蛋白（PI<6.4）非变性电泳。整套电泳体系中不能含有SDS，搭配非变性电泳缓冲液（Cat. No. M00727C/M00729C）和上样缓冲液（Cat. No. M00726C）使用。

• 10. 使用凯发一触即发蛋白预制胶进行非变性电泳 ，是否有推荐的实验条件？

  非变性电泳由于受蛋白质的亚基及电荷量少的影响，存在条带偏移率低（泳动速度慢）、条带不够锋利等现象。由于非变性电泳时间较长，请根据实验设计先进行电泳条件优化。电泳缓冲液应调至碱性使酸性蛋白尽可能多的带上电荷，每个蛋白的性质和带电量都不一样，具体需要通过实验摸索最适电泳条件和PH值。

• 11. GenScript预制胶是否可以跑还原/非还原电泳吗？

  可以，预制胶中不含还原剂，可根据实验需要，在上样缓冲液中添加还原剂。

• 12. 电泳过程中，溴酚蓝前沿上方为什么会有一条黄色的线？

  Loading buffer中有酚红，酚红在PH值6.8以内为黄色，在pH值8.4以上时为红色，不影响实验结果。

• 13. 可以后续切胶做质谱吗？

  可以。

• 14. MOPS浓缩液变黄可以使用吗？

  MOPS和Tris会发生氧化，保质期内变黄不影响使用。

• 15. 为什么在蛋白转印时凝胶变的很粘？

  低浓度凝胶质地较软，转膜时易受热，与转印膜粘连。

• 16. 其他公司的出品的染料是否可以用于凯发一触即发预制胶染色？

  每家公司的蛋白染料产品配方不同。以考马斯亮蓝G250或R250为主要成分的染色液与ExpressPlus预制胶产品兼容性较好。推荐使用凯发一触即发出品的eStain L1蛋白染色仪（Cat.No：L00657）对电泳后凝胶进行处理。目前确认凯发一触即发蛋白预制胶与Thermo Fisher Scientific Inc.的染料不兼容。天根生化科技（北京）有限公司的考马斯亮蓝快速染色液可用于ExpressPlus预制胶产品的染色。

• 17. 过夜脱色会影响条带的锐度吗？

  不同的脱色液配方会影响脱色效果。推荐用于过夜脱色的脱色液配方是：15%乙醇，10%乙酸的水溶液。

• 18. ExpressPlus™预制胶和SurePAGE™预制胶在室温下稳定吗？

  SurePAGE™在25℃左右可保存6个月。为获得更佳的实验效果，请2-8℃保存。

• 19. 如何使用传统染色脱色方法处理蛋白预制胶？
  • A. 考马斯亮蓝R-250使用微波炉染色：
  1. 配制染色液：在40%乙醇和10%醋酸溶液中溶解终浓度为0.1%（W/V）的考马斯亮蓝R-250。
  2. 配制脱色液：将终浓度为10%（V/V）乙醇、7.5%（V/V）醋酸溶解在一起。
  3. 电泳完成后，撬开胶板取出凝胶，然后放入装有100ml染色液的染色容器中。
  4. 盖上容器盖子并放入微波炉中用高热档位加热8分钟。为了避免危险，请注意不要让溶液沸腾。
  5. 从微波炉中取出染色容器，放在脱色摇床上常温轻摇5分钟。
  6. 倒掉染色液并用去离子水小心清洗凝胶。
  7. 倒掉去离子水，并加入100ml脱色液。
  8. 盖上盖子，放入微波炉中用高热档位加热8分钟。
  9. 倒掉脱色液，加入新的脱色液，重复步骤8。
  10. 从微波炉中取出，放在脱色摇床上常温轻轻震荡至背景清晰。
  • B. 考马斯亮蓝R-250常规染色：
  1. 配制染色液：在40%乙醇和10%醋酸溶液中溶解终浓度为0.1%（W/V）的考马斯亮蓝R-250。
  2. 配制脱色液：将终浓度为10%（V/V）乙醇、7.5%（V/V）醋酸溶解在一起。
  3. 电泳完成后，撬开胶板取出凝胶，然后放入装有100ml染色液的染色容器中。
  4. 放于摇床上轻摇1小时。
  5. 倒掉染色液并用去离子水小心清洗凝胶。
  6. 倒掉去离子水，并加入100ml脱色液。
  7. 放于摇床上轻摇1小时。
  8. 更换新鲜脱色液，继续放于摇床上脱色1小时。
  9. 重复步骤7、8一次。
  10. 更换新鲜脱色液，放于摇床上过夜脱色至次日背景清晰。
• 20. 预制胶疑难解答

  问题	可能原因	解决方法
  条带变形	上样孔中有气泡或者有凝胶保存缓冲液。	加注电泳缓冲液前后，使用注射器吸取缓冲液轻轻冲洗上样孔，将气泡吹出。
  	样品蛋白浓度过高。	使用上样缓冲液稀释蛋白样品。
  条带拖曳、滞孔	样品中含有较大颗粒杂质如细胞碎片、菌体碎片。	高速离心后，取上清液电泳。
  	蛋白样品（如包涵体蛋白）	在样品中添加额外的十二烷基硫酸钠硫酸钠（SDS）或者使用上样缓冲液稀释样品。
  	未充分溶解。
  高浓度条带出现在相邻泳道	上样时，样品溢出到相邻条带。	降低上样量。发现溢出时使用缓冲液冲洗上样孔。
  	上样孔破损	移除制孔梳时加倍小心。发现上样孔破损后换用新的凝胶。
  	胶板变形。	在安装预制胶时先移除制孔梳，再固定在电泳槽内。
  		使用垫片、翻转密封条时注意是否会对凝胶产生过大的压力，导致凝胶变形。
  	凝胶变干，上样孔萎缩。	打开包装后，防止凝胶干燥。
  		为防止凝胶变干，可以尽快装置到电泳槽内，并加注电泳缓冲液。
  		怀疑凝胶变干时，可将凝胶在电泳缓冲液中浸泡一段时间，待凝胶恢复形状后上样。
  泳道整体成外“八”字形	电泳槽内槽漏液	确认电泳槽与凯发一触即发预制胶是否匹配，如有阶梯状硅胶条应翻转到平坦的一面 ；
  		电泳槽两端尽量水平，将内槽液加满，并观察5min内槽液是否有液面降低情况，如有请重新检查安装；
  		防止电泳液出现大量气泡；
  		如仍然漏液，建议更换电泳槽，或在电泳过程中补加内槽液，确保内槽液加满状态。
  	胶板变形。	安装预制胶时先移除制孔梳，再固定在电泳槽内。
  		使用垫片、翻转密封条时注意是否会对凝胶产生过大的压力，导致凝胶变形。
  条带迁移速度过慢	凝胶底部绿色胶带未移除。	移除绿色密封胶带。
  	凝胶安装不当，电泳槽内槽漏液（与外槽有溶液联通现象）。	检查内槽密封条、垫片等附件是否安装恰当。
  		确认凝胶安装位置，重新安装凝胶。
  	电压设置有误，或者使用了不当的电泳缓冲液。	推荐使用140V恒压条件电泳。
  		推荐使用正确浓度的MOPS电泳缓冲液
  蛋白条带前沿模糊	离子干扰（小分子蛋白电泳容易出现此现象）。	换用MES电泳缓冲液。
  蛋白条带前沿变黄	电泳缓冲液性能下降，pH降低	换用新鲜配制的电泳缓冲液。
  	外槽液太少	外槽电泳液加到2/3处，防止电泳过程中温度过高
  	使用两边夹紧架胶类型的电泳槽如伯乐、天能（会概率性的使板变形从而跑黄）	推荐使用GenScript配套电泳槽（Cat.No. L00780），受力更均匀，
  蛋白分离效果不佳	凝胶浓度选择不当。	根据凝胶最佳分离范围选用不同浓度凝胶。
  		对于小分子蛋白的分离，请选用较高分离胶浓度的预制胶产品或者换用专门为小蛋白开发的预制胶产品。
  	样品蛋白量超出凝胶分离能力。	降低上样量，将总蛋白量控制在60μg以内
  	样品含盐量过高。	使用透析、超滤，或者稀释的方法降低盐浓度后电泳。
  	电泳体系温度过高。	提高电泳缓冲液用量。
  		或者使用冰袋对缓冲液降温降温、在低温环境中进行电泳实验等方法改善效果。
  	MOPS电泳缓冲液性能无法达到实验设计要求。	换用MES电泳缓冲液进行尝试。
  8%的胶在转膜时粘在膜上	凝胶浓度低、质地较软，转膜时易受热，与转印膜粘连。	添加冰袋、或在低温环境中进行实验，控制转膜温度。
  酸性蛋白的非变性电泳条带模糊，点样空附近跑不下来	非变性电泳由于受蛋白质的亚基及电荷量少的影响，存在涌动速度慢、条带不够锋利等现象。	优化电泳缓冲液的pH，保证蛋白条带带有足够的电量。
  碱性蛋白的非变性电泳结果不理想	凯发一触即发蛋白预制胶不适合跑碱性蛋白的非变性电泳。	建议客户使用手工玻璃胶，摸索电泳缓冲液的pH进行电泳。